Akumulacja jądrowego p53 i progresja nowotworu w raku pęcherza moczowego cd

Guzy z 0 do 9 procentowym wybarwieniem jądrowym uznano za negatywne pod względem p53, podczas gdy nowotwory z 10 do 100 procentowym wybarwieniem w jądrze uznano za p53-pozytywne. Pięć mikrometrowych sekcji utrwalonej w formalinie, zatopionej w parafinie tkanki umieszczono na szkiełkach powleczonych poli-l-lizyną (Sigma, St. Louis). Procedurę immunohistochemiczną przeprowadzono jak opisano w innym miejscu 5. W skrócie, po deparafinizacji i blokowaniu endogennej peroksydazy, monoklonalne przeciwciało monoklonalne przeciw PA5318 (klasa IgG1, rozcieńczenie 1:10, Biogenex, San Ramon, CA) inkubowano przez noc z tkanką w temperaturze 4 ° C. PAb1801 rozpoznaje białko p53 w epitopie odpornym na denaturację, odpowiadającym aminokwasom od 32 do 79. Następnie tkanki inkubowano z biotynylowanym drugorzędowym przeciwciałem przeciw końowi (Vector Labs, Burlingame, CA) i reaktywność wizualizowano za pomocą awidyny-biotyny. układ immunoperoksydazy (wektor) z zastosowaniem diaminobenzydyny (0,03%) jako chromogenu i hematoksyliny jako kontrastu. Próbki raka pęcherza ze znanymi mutacjami p53 i udokumentowanymi nagromadzeniami białka p53 za pomocą analizy immunohistochemicznej zastosowano jako kontrole pozytywne. Prawidłowe nabłonek i komórki nienabłonkowe (limfocyty, komórki zrębu i komórki śródbłonka), stosowane jako wewnętrzne kontrole negatywne, nie wykazywały immunoreaktywności. Ocenie poddano wyłącznie lokalizację jądrową immunoreaktywności. Zakres reaktywności jądrowej sklasyfikowano w czterech kategoriach: brak reaktywności jądrowej; kilka ogniskowo pozytywnych jąder (od do 9 procent komórek nowotworowych); heterogenna reaktywność jądrowa (10 do 49 procent komórek nowotworowych); i intensywna jednorodna reaktywność jądrowa (50 do 100 procent komórek nowotworowych) (Figura 1). Jedynie próbki wykazujące co najmniej 10% reaktywności jądrowej uznano za p53-dodatnie (w celu zmiany w p53). Oparliśmy to kryterium na naszej demonstracji silnej korelacji mutacji w genie p53 z akumulacją białka p53 w 10 procentach lub więcej jądra komórki nowotworowej5. Analizę immunohistochemiczną przeprowadzono bez znajomości stadium nowotworu lub wyników obserwacji klinicznej.
Analiza statystyczna
Przeżywalność obliczono z cystektomii do daty zgonu lub daty ostatniej obserwacji (wizyta kliniczna lub dyskusja z lekarzem prowadzącym pacjenta); zgony z jakiejkolwiek przyczyny uznano za reprezentujące niepowodzenia leczenia. Czas do nawrotu obliczono z cystektomii do daty pierwszego udokumentowanego nawrotu klinicznego lub ostatniej obserwacji; Dane dotyczące pacjentów, którzy zmarli bez choroby przed jakimkolwiek nawrotem były cenzurowane w chwili śmierci. Wiadomo, że jeden pacjent zmarł na chorobę, ale data nawrotu nie była znana i dlatego wykorzystano datę w połowie drogi między ostatnią wizytą w klinice a datą zgonu. Do celów analizy statystycznej akumulacje jądrowe p53 sklasyfikowano jako pozytywne (akumulacja w 10 procentach lub więcej komórek nowotworowych) lub ujemne.
Tabele kontyngencji, test chi-kwadrat Pearsona i regresja logistyczna17 zostały wykorzystane do oceny związku akumulacji p53 ze stanem węzła chłonnego, stadium patologicznego guza pierwotnego i stopniem histologicznym
[więcej w: solinka polańczyk, włókna purkiniego, apteka zielona góra dyżur ]

Powiązane tematy z artykułem: apteka zielona góra dyżur solinka polańczyk włókna purkiniego